Odczyn papainowy

Do wykonania odczynu należy przygotować te same składniki j.w., z dodatkiem roztworu papainy. Papaina jest to enzym proteolityczny o swoistym oddziaływaniu na powierzchnię krwinek czerwonych oddziaływanie to umożliwia aglutynację krwinek pod wpływem niekompletnych przeciwciał anty-Rh, w środowisku fizjologicznego roztworu NaCł.

Przygotowanie roztworu papainy. Papainę należy rozpuścić w buforze fosforanowym o pH 6,2, w proporcji 10 g papainy na 250 ml buforu. Roztwór należy odwirować i do płynu znad osadu dodać chlorowodorek cysteiny (czynnik aktywujący), rozpuszczony uprzednio w proporcji 4,85 g na 25 ml buforu. Roztwór uzupełnia się w kolbie miarowej do objętości 1 000 ml przez dodanie ww. buforu fosforanowego. Całość płynu należy umieścić w cieplarce o temp. 37stopni na 1 godzinę. Po wyjęciu z cieplarki roztwór przesącza się przez filtr Seitza EIC (zestaw wyjałowiony). Przesącz należy rozlać jałowo do jałowych ampułek po

-1 ml i przechowywać w zamrażarce, względnie zliofilizować. Po rozmrożeniu papaina zachowuje pełną aktywność tylko w ciągu kilku godzin (2-3 godziny), o ćzym nie wolno zapominać! Przetrzy-mana dłużej papaina inaktywuje się i może stać się przyczyną mylnych wyników próby.

You can skip to the end and leave a response. Pinging is currently not allowed.

Leave a Reply

Designed by WordPress.